Cryopreservation and rederivation

Cryopreservation of sperm and embryos is the most valid alternative to the maintenance of live mouse colonies. Indeed, by cryopreservation you can backup your precious transgenic strains, and dramatically reduce costs for their maintenance. Moreover, cryopreservation represents the best solution to deal with infections and genetic drift. By our refined cryopreservation technique, we maintain the vitality of frozen sperm and embryos, thus ensuring a fast and efficient recover of cryopreserved mouse strains by rederivation. Depending on your specific needs, we offer different cryopreservation and rederivation services:

• Cryopreservation of 2-cell embryos obtained by In Vitro Fertilization (IVF) of oocytes from wild-type females with sperm from mutant mice, in order to maintain the transgene of interest in heterozygosis;
• Cryopreservation of 8-cell embryos obtained by crossing transgenic animals supplied by the customer, to maintain the transgene of interest in homozygosis;
• In utero implantation of cryopreserved 2-cell or 8-cell embryos, to rederive cryopreserved mouse strains;
• Cryopreservation of mouse sperm.

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Generation of transgenic mice.

Transgenic mice represent since decades an extremely precious and valuable resource in biomedical research, allowing to reliably model human pathologies and to undisclose the molecular mechanisms underlying their pathogenesis. The enrichment of knowledge concerning human diseases, and the identification of novel therapeutic strategies strictly relies upon the correct production and characterization of the most suitable animal models. We are here to help you in this tricky task: we will make stronger the translational potential of your findings.

• Production of mouse chimeras by aggregation of embryonic stem cells (ES) with 8-cell embryos;
• Production of mouse chimeras by microinjection of embryonic stem cells (ES) into blastocysts;
• Production of mice bearing specific mutations by using genome editing techniques.

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Custom services

Our qualified staff is trained to perform any procedure you may need to accomplish your research project: from the simplest to the more complicated ones, both in conditional and SPF conditions. Our broad expertise in animal research and our flexibility are at your service, to perform the finest experiments in a fast and efficient manner, thus obtaining more robust results. We will assist you in planning your work and in solving any tricky request.

Some examples:

• Drugs administration: per os (gavage), subcutaneous, intraperitoneal and intravenous;
• Subcutaneous implants;
• In utero transplantation (IUT);
• Caesarean section;
• Vaginal plug monitoring, to assess the copula occurrence;
• Epididima collection;
• Caudectomy;
• Fine surgical procedures.

CONTACTS

Prof. Paolo Bonaldo

Research activity

He is Full Professor of Cell Biology at the Medical School of The University of Padova, and Head of the “Matrix Biology and Functional Genomics” Unit at the Department of Molecular Medicine, University of Padova. His research work has been founded, among others, by European Union, Telethon Foundation, and MIUR (FIRB and PRIN programmes). He was invited as a speaker in >50 international meetings and gave >70 invited lectures in international research institutes; he was chairman and/or organizer of 12 international meetings. He is co-inventor of five patents. He authored 146 full-length publications in peer-reviewed journals (58 as first or last/corresponding author), including several high impact journals such as Nature Genetics and Nature Medicine. Total Impact Factor: >900; mean Impact Factor: 6.5; total citations: >10000; total H-index: 46; H-index in the last five years: 38.

His main interest is the extracellular matrix and in particular the study of the structural and functional properties of some of its components, initially through biochemical and cellular/molecular biology approaches, and subsequently through functional genomic studies in mice and other model organisms. In his most recent studies, he clarified the mechanisms causing the accumulation of altered organelles in muscle diseases related to collagen VI, demonstrating that the persistence of malfunctioning organelles and apoptosis are determined by a defect of the autophagic process and opening new therapeutic perspectives for such diseases .

Key publications

• 1.

  Urciuolo A., Quarta M., Morbidoni Cescon M., Gregorio I., Eiber N., Borgia D., Fusto A., Sabatelli P., Scorzeto M., Megighian A., Pegoraro E., Hashemolhosseini S., Bonaldo P. Collagen VI is required for the structural and functional integrity of the neuromuscular junction. Acta Neuropathologica, in press, 2018.

• 2.

  Urciuolo A., Quarta M., Morbidoni V., Gattazzo F., Molon S., Grumati P., Montemurro F., Tedesco F.S., Blaauw B., Cossu G., Vozzi G., Rando T.A., Bonaldo P. Collagen VI regulates satellite cell self-renewal and muscle regeneration. Nature Communications 4, 1964 (1-13), 2013.

• 3.

  Grumati P., Coletto L., Sabatelli P., Cescon M., Angelin A., Bertaggia E., Blaauw B., Urciuolo A., Tiepolo T., Merlini L., Maraldi N.M., Bernardi P., Sandri M., Bonaldo P. Autophagy is defective in collagen VI muscular dystrophies, and its reactivation rescues myofiber degeneration. Nature Medicine 16, 1313-1320, 2010.

• 4.

  Merlini L., Martoni E., Grumati P., Sabatelli P., Squarzoni S., Urciuolo A., Ferlini A., Gualandi F., Bonaldo P. Autosomal recessive myosclerosis myopathy is a collagen VI disorder. Neurology 71, 1245-1253, 2008.

• 5.

  Irwin W.A., Bergamin N., Sabatelli P., Merlini L., Megighian A., Reggiani C., Braghetta P., Columbaro M., Volpin D., Bressan G.M., Bernardi P., Bonaldo P. Mitochondrial dysfunction and apoptosis in myopathic mice with collagen VI deficiency. Nature Genetics 35, 367-371, 2003.

Prof. Giorgio Bressan

Research activity

He is Full Professor in Histology at the School of Medicine, University of Padova. He is Author of 65 original articles in ISI-reviewed journals, with total IF: 365; Total citations: 2642; h-index: 24 (source: Scopus).

His research mainly concerns the function and regulation of extracellular matrix protein expression. Particular importance is given to the functional interaction between growth factors and components of the extracellular matrix. These topics are mainly carried out with functional genomics studies using the technology of transgenesis in mice.

Key publications

• 1.

  Carnevale D, Facchinello N, Iodice D, Bizzotto D, Perrotta M, De Stefani D, Pallante F, Carnevale L, Ricciardi F, Cifelli G, Da Ros F, Casaburo M, Fardella S, Bonaldo P, Innocenzi G, Rizzuto R, Braghetta P, Lembo G, Bressan GM. Loss of Emilin-1 enhances arteriolar myogenic tone through TGF-β dependent transactivation of EGFR and is relevant for hypertension in mice and humans. Arterioscler Thromb Vasc Biol accepted manuscript, 2018.

• 2.

  Litteri G, Carnevale D, D'Urso A, Cifelli G, Braghetta P, Damato A, Bizzotto D, Landolfi A, Ros FD, Sabatelli P, Facchinello N, Maffei A, Volpin D, Colombatti A, Bressan GM, Lembo G. Vascular smooth muscle Emilin-1 is a regulator of arteriolar myogenic response and blood pressure. Arterioscler Thromb Vasc Biol32:2178- 84, 2012.

• 3.

  Zacchigna L, Vecchione C, Notte A, Cordenonsi M, Dupont S, Maretto S, Cifelli G, Ferrari A, Maffei A, Fabbro C, Braghetta P, Marino G, Selvetella G, Aretini A, Colonnese C, Bettarini U, Russo G, Soligo S, Adorno M, Bonaldo P, Volpin D, Piccolo S, Lembo G, Bressan GM. Emilin1 links TGF-beta maturation to blood pressure homeostasis. Cell 124:929-42, 2006.

• 4.

  Zanetti M, Braghetta P, Sabatelli P, Mura I, Doliana R, Colombatti A, Volpin D, Bonaldo P, Bressan GM. EMILIN-1 deficiency induces elastogenesis and vascular cell defects. Mol Cell Biol 24:638-50, 2004.

• 5.

  Bonaldo P, Braghetta P, Zanetti M, Piccolo S, Volpin D, Bressan GM. Collagen VI deficiency induces early onset myopathy in the mouse: an animal model for Bethlem myopathy. Hum Mol Genet 7:2135-40, 1998.

Prof. Paola Braghetta

Research activity

She is Associate Professor of Cell Biology at the Medical School of The University of Padova, and Head of the Unit of transgenic mice generation and cryopreservation of murine embryos. Her main interests are related to: the development of prokaryotic vectors for the production of fusion proteins; the production and usage of antibodies against membrane proteins associated with membranous organelles (trans-Golgi Network); the analysis of in vivo expression of extracellular matrix proteins in adult mice and during development; the study of the function of proteins through the use of genetically modified animals; the study of the pathogenic pathways associated with absence of matrix proteins; the production of transgenic and knockout mice by microinjection of DNA into oocytes, and of mutagenized embryonic stem cells in blastocysts and of lentiviral particles in early embryos.

She is author of 53 publications on international scientific journals, total h-index: 21, 2809 total citations (source: Scopus).

Key publications

• 1.

  Da Ros F, Carnevale R, Cifelli G, Bizzotto D, Casaburo M, Perrotta M, Carnevale L, Vinciguerra I, Fardella S, Iacobucci R, Bressan GM, Braghetta P*, Lembo G*, Carnevale D*. Targeting Interleukin-1β Protects from Aortic Aneurysms Induced by Disrupted Transforming Growth Factor β Signaling. Immunity 47:959-973.e9, 2017. *, equal contribution.

• 2.

  Bertin E, Piccoli M, Franzin C, Spiro G, Donà S, Dedja A, Schiavi F, Taschin E, Bonaldo P, Braghetta P, De Coppi P, Pozzobon M. First step to define murine amniotic fluid stem cell microenvironment. Sci Rep 6:37080, 2016.

• 3.

  Zanetti M§, Braghetta P§, Sabatelli P, Mura I, Doliana R, Colombatti A, Volpin D, Bonaldo P and Bressan GM. EMILIN-1 deficiency induces elastogenesis and vascular cell defects. Mol Cell Biol 24: 638-650, 2004. §, equal contribution.

• 4.

  Fabbro C, Braghetta P, Girotto D, Piccolo S, Volpin D and Bressan GM. Cell type-specific transcription of the 1(VI) collagen gene. Role of the AP1 binding site and of the core promoter. J Biol Chem 274: 1759-1766, 1999.

• 5.

  Braghetta P, Fabbro C, Piccolo S, Marvulli D, Bonaldo P, Volpin D, Bressan GM. Distinct regions control transcriptional activation of the alpha1(VI) collagen promoter in different tissues of transgenic mice. J Cell Biol 135:1163-77, 1996.

Dott.ssa Silvia Donà

Research activity

She is a Doctor in Veterinary Medicine, experienced in equine and murine in vitro fertilization. She had a long traineeship abroad in Spain and in the UK in many clinics where she was in charge of surgical emergencies in horses, comprising anaesthesia and follow-up. She is now a freelance professional veterinary and has the responsibility of a horse reproduction facility. She attended the CARD-CNB Course “Mouse Sperm and Embryo Cryopreservation”, held in Barcelona, Spain, in October 2013. Since 2010, she has been collaborating with Prof. Paola Braghetta, setting up the cryopreservation facility in the Department of Molecular Medicine, being responsible for the maintenance of mouse colonies, embryo manipulation and surgical techniques in mice. She recently contributed to some scientific paper, published in international peer-reviewed journals.

• 1.

  Gattazzo F, De Maria C, Rimessi A, Donà S, Braghetta P, Pinton P, Vozzi G, Bonaldo P. Gelatin-genipin-based biomaterials for skeletal muscle tissue engineering. J Biomed Mater Res B Appl Biomater [Epub ahead of print], 2018.

• 2.

  Bertin E, Piccoli M, Franzin C, Spiro G, Donà S, Dedja A, Schiavi F, Taschin E, Bonaldo P, Braghetta P, De Coppi P, Pozzobon M. First steps to define murine amniotic fluid stem cell microenvironment. Sci Rep 6:37080, 2016.

• 3.

  Falzarano MS, Passarelli C, Bassi E, Fabris M, Perrone D, Sabatelli P, Maraldi NM, Donà S, Selvatici R, Bonaldo P, Sparnacci K, Laus M, Braghetta P, Rimessi P, Ferlini A. Biodistribution and molecular studies on orally administered nanoparticle-AON complexes encapsulated with alginate aiming at inducing dystrophin rescue in mdx mice. Biomed Res Int 2013:527418, 2013.

In the last two decades, MEMMIA team members acquired skills in different techniques for the generation of transgenic animals. As demonstrated by different scientific publications, we are experienced in the generation of mice bearing transgenic alleles of different types: reporter [1]; knockout [2, 3]; conditional knockout [4]; and gene trap [5]. Furthermore, we gained experience in conditional and non-conditional gene silencing in vivo by lentivirus-mediated iRNA [6].

For reference, see:

• 1.

  Braghetta P, Fabbro C, Piccolo S, Marvulli D, Bonaldo P, Volpin D, Bressan GM. Distinct regions control transcriptional activation of the alpha1(VI) collagen promoter in different tissues of transgenic mice. J Cell Biol 135:1163-77, 1996.

• 2.

  Bonaldo P, Braghetta P, Zanetti M, Piccolo S, Volpin D, Bressan GM. Collagen VI deficiency induces early onset myopathy in the mouse: an animal model for Bethlem myopathy. Hum Mol Genet 7:2135-40, 1998.

• 3.

  Zanetti M, Braghetta P, Sabatelli P, Mura I, Doliana R, Colombatti A, Volpin D, Bonaldo P, Bressan GM. EMILIN-1 deficiency induces elastogenesis and vascular cell defects. Mol Cell Biol 24:638-50, 2004.

• 4.

  Carnevale D, Facchinello N, Iodice D, Bizzotto D, Perrotta M, De Stefani D, Pallante F, Carnevale L, Ricciardi F, Cifelli G, Da Ros F, Casaburo M, Fardella S, Bonaldo P, Innocenzi G, Rizzuto R, Braghetta P, Lembo G, Bressan GM. Loss of Emilin-1 enhances arteriolar myogenic tone through TGF-β dependent transactivation of EGFR and is relevant for hypertension in mice and humans. Arterioscler Thromb Vasc Biol accepted manuscript, 2018.

• 5.

  Bonaldo P, Chowdhury K, Stoykova A, Torres M, Gruss P. Efficient gene trap screening for novel developmental genes using IRES beta geo vector and in vitro preselection. Exp Cell Res 244:125-36, 1998.

• 6.

  Frka K, Facchinello N, Del Vecchio C, Carpi A, Curtarello M, Venerando R, Angelin A, Parolin C, Bernardi P, Bonaldo P, Volpin D, Braghetta P, Bressan GM. Lentiviral-mediated RNAi in vivo silencing of Col6a1, a gene with complex tissue specific expression pattern. J Biotechnol 141:8-17, 2009.

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